Gossypin’in L929 Fibroblast Hücrelerindeki Hidrojen Peroksit Hasarına Karşı Koruyucu Etkilerinin Değerlendirilmesi

Gossypin’in L929 Fibroblast Hücrelerindeki Hidrojen Peroksit Hasarına Karşı Koruyucu Etkilerinin Değerlendirilmesi [Kafkas J Med Sci]

Kafkas J Med Sci. 2020; 10(1): 15-23 | DOI: 10.5505/kjms.2020.06025

Gossypin’in L929 Fibroblast Hücrelerindeki Hidrojen Peroksit Hasarına Karşı Koruyucu Etkilerinin Değerlendirilmesi

İrfan Çınar
Kafkas Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Farmakoloji Anabilim Dalı, Kars, Türkiye

Amaç: Bu çalışmada, fare L929 fibroblast hücrelerinde H2O2 kaynaklı oksidatif stresi önlemede ve yara iyileşme modelinde Gossypin’in kapasitesini değerlendirdik.
Materyal ve Metot: Gossypin’in (5–200 μg/mL) ve H2O2’nin (0,3–0,9 mM) in-vitro yara iyileşme aktivitesi, hücre canlılığı ve sitotoksisite indeksleri MTT tahlili kullanılarak fare fibroblast hücre hattı L929’da değerlendirildi. Çalışmada, in-vitro yara iyileşme testi modeli olarak migrasyon testi yapıldı. Antioksidan aktivitenin değerlendirilmesi amacı ile H2O2’nin (0,5 mM) konsantrasyonu kullanıldı. SOD aktivitesi ve MDA seviyesi belirlendi. Ayrıca Gossypin dozlarının H2O2’nin neden olduğu hasarı azaltıp azaltamadığını değerlendirmek için, gerçek zamanlı PCR kullanarak L929 hücrelerinde IL-1β ve TNF-α mRNA ekspresyon seviyelerini analiz ettik.
Bulgular: H2O2 (0,3–0,9 mM) uygulamasının doz bağımlı olarak, Gossypin’in (5–200 μg/mL) ise 75 μg/mL’den sonra L929 hücrelerine proliferasyonu inhibe ettiği belirlenmiştir. Gossypin’in 25 ve 50 μg/mL dozları H2O2 (0,5 mM) uygulamasına karşı 48. ve 72. saatlerde L929 hücrelerini korumuştur. Bu sonuçlar migrasyon testi ile doğrulanmıştır. Gossypin uygulanması, antioksidan aktivitesini önemli ölçüde arttırmış, MDA oluşumunu azaltmıştır. Özellikle 50 μg/mL grubu ve H2O2 grubuna kıyasla SOD’u arttırmıştır. Gossypin dozları değerlendirilen H2O2 grubuna kıyasla IL-1β ve TNF-α mRNA ekspresyonunu anlamlı şekilde azaltmıştır.
Sonuç: Bu çalışmada, L929 hücrelerinde H2O2 tarafından indüklenen oksidatif stresinden koruyarak fibroblast canlılığı ve migrasyonu üzerinde güçlü bir etki göstermiştir. Bu, Gossypin’in H2O2’nin neden olduğu oksidatif stres ile ilişkili hastalıklarının önlenmesinde potansiyel etkisini ortaya koymaktadır. Buda cilt dokusunun H2O2’nin neden olduğu oksidatif stres benzeri hasarlanmalara bağlı hastalıkların tedavisinde Gossypin’in kullanılabileceğini göstermektedir.

Anahtar Kelimeler: Gossypin, L929, H2O2, oksidatif stres; yara iyileşmesi

Evaluation of Protective Effects of Gossypin against Hydrogen Peroxide Damage in L929 Fibroblast Cells

İrfan Çınar
Kafkas University, Faculty of Medicine, Department of Pharmacology, Kars, Turkey

Aim: In this study, we evaluated the capacity of Gossypin in H2O2- induced oxidative stress and wound healing model in mouse L929 fibroblast cells.
Material and Method: In vitro wound healing activity, cell viability and cytotoxicity indexes of Gossypin (5–200 μg/mL) and H2O2 (0.3–0.9 mM) were evaluated in the mouse fibroblast cell line L929 using the MTT assay. Migration test was performed as an in vitro wound healing test model. The concentration of H2O2 (0.5 mM) was used to evaluate the antioxidant activity. SOD activity and MDA level were determined. We also analyzed IL-1β and TNF-α mRNA expression levels in L929 cells using real-time PCR to assess whether Gossypin doses could reduce H2O2-induced damage.
Results: H2O2 (0.3–0.9 mM) was dose-dependent and gossypin (5–200 μg/mL) inhibited proliferation to L929 cells after 75 μg/mL. 25 and 50 μg/mL doses of Gossypin protected L929 cells at 48 and 72 hours against the administration of H2O2 (0.5 mM). These results were confirmed by migration test. Gossypin administration significantly increased antioxidant activity and decreased MDA formation. especially 50 μg/mL group and increased the SOD compared to H2O2 group. Gossypin doses significantly decreased IL-1β and TNF-α mRNA expression compared to the evaluated H2O2 group.
Conclusion: In this study, a strong effect on fibroblast viability and migration by protecting against oxidative stress induced by H2O2 in L929 cells was demonstrated. This indicates the potential effect of Gossypin on the prevention of oxidative stress-related diseases caused by H2O2. This shows that gossypin can be used in the treatment of diseases caused by oxidative stress-like damage caused by H2O2 of skin tissue.

Keywords: Gossypin, L929, H2O2, oxidative stress; wound healing

İrfan Çınar. Evaluation of Protective Effects of Gossypin against Hydrogen Peroxide Damage in L929 Fibroblast Cells. Kafkas J Med Sci. 2020; 10(1): 15-23

Sorumlu Yazar: İrfan Çınar, Türkiye

ARAÇLAR